当前位置:主页 > DNA >

DNA提取过程中各种试剂的作用及原理

时间:2023-02-24 05:26

人气:

编辑:试管助孕网

  碱裂解法原理

  在pH 12.0 ~ 12.6碱性环境中,细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开,而共价闭环的质粒DNA虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态。

  将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下,大部分染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀,而质粒DNA仍然为可溶状态。通过离心,可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质,质粒DNA尚在上清中,然后用酚、氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。

  电泳检测:质粒电泳一般有三条带,分别为质粒的超螺旋、开环、线型三种构型。

  DNA提取过程中各种 试剂 的作用及原理

  溶液I—溶菌液:

  溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键,因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时,溶菌酶作用受到抑制。

  葡萄糖:增加溶液的粘度,维持渗透压,防止DNA受机械剪切力作用而降解。

  EDTA:(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子,抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);(2)EDTA的存在,有利于溶菌酶的作用,因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。

  2.溶液II-NaOH-SDS液:

  NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是稳定的。

  但当pH>12或pH<3时,就会引起双链之间氢键的解离而变性。

  在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L,加抽提液时,该系统的pH就高达12.6,因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。

  SDS:SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有:

  (1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白,因而溶解 膜蛋白 而破坏细胞膜。

  (2)解聚细胞中的 核蛋白 。

  (3)SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖 核酸酶 的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它去除干净,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA时)受到干扰。

温馨提示:以上内容整理于网络,仅供参考,如果对您有帮助,留下您的阅读感言吧!
相关阅读
本类排行

本站资料均来源互联网收集整理,作品版权归作者所有,如果侵犯了您的版权,请跟我们联系。湘ICP备2020023243号 | 商务合作